大鼠少突胶质前体细胞的使用和样本的处理方法介绍

更新时间：2021-11-17

点击次数：1678

　　大鼠少突胶质前体细胞使用方法：

　　1、收到细胞后，请按照以下方法进行操作：取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜*培养液继续培养或进行传代。

　　2、细胞传代：

　　1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，清洗细胞一次。

　　2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1m至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中。

　　3)弃上清，沉淀细胞用12ml*培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，放入379C， 5%CO2细胞培养箱中培养。

　　4)待细胞*贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

　　3、细胞冻存：

　　1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。

　　2)添加胰蛋白酶消化液约1m至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中。

　　3)用适量的冻存液悬细胞，并放置于冻存管中。

　　4)先将大鼠少突胶质前体细胞冻存管放置于20°C 1.5h，然后将其移，入-80°C过夜， 24h后转入液氨中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80°C。

　　正确的处理样本是保证ELISA检测的正确性和准确性的一步，下面简单介绍一下不同类型的样本的处理方法：

　　1.血清。血清是常用于ELISA检测的一类样本，处理也比较简单，采血过程中应避免溶血，因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质，在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色，而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染，因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。

　　2.血浆。用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本，将上清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融，避免使用溶血或高血脂的标本。

　　3.细胞培养上清，取细胞培养上清到离心管，除去细胞碎片及杂质，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

　　4.细胞裂解液。

　　5.组织匀浆液。

　　6、尿液、唾液等其他液体生物样本。